In der Eröffnungstrainingssitzung in Jerez übernahm der Gresini Ducati-Fahrer Alex Marquez die Führung und überholte damit seinen Bruder Marc, der den Großteil der Sitzung angeführt hatte. Für die meisten 45 Minuten stand es Marquez 1-2. Allerdings traf Alex Marquez die strategische Entscheidung, am Ende der Sitzung die Reifen zu wechseln, was ihm ermöglichte, seinen Bruder zu überholen und mit der schnellsten Zeit von 1m36.630s zu beenden. Er lag eine halbe Sekunde vor Marc Marquez und seinem Teamkollegen. Maverick Vinales, der am Circuit of the Americas dominiert hatte, sicherte sich den dritten Platz, nachdem er einen neuen Satz Reifen montiert hatte. Aleix Espargaro verbesserte seine Position auf der letzten Runde und belegte den vierten Platz. Franco Morbidelli auf einer 2024 Ducati kam auf den fünften Platz, während andere Fahrer auf demselben Motorrad, Jorge Martin, Pecco Bagnaia und Enea Bastianini, jeweils auf den Plätzen neun, zwölf und 13 landeten. KTM-Wildcard-Fahrer Dani Pedrosa war der Schnellste unter den RC16-Fahrern und belegte den sechsten Platz, dicht gefolgt von Brad Binder. Die anderen Wildcard-Fahrer, Lorenzo Savadori und Stefan Bradl, belegten die Plätze 23 und 24 und drängten Luca Marini auf den letzten Platz. Savadori fährt ein experimentelles Motorrad mit neuen Funktionen, das Aprilia später in der Saison einsetzen möchte. Bradls RC213V hingegen wurde in Bezug auf Aerodynamik und Sitzeinheit im Vergleich zu regulären Motorrädern erheblich verändert. Zwei Fahrer, Johann Zarco und Augusto Fernandez, hatten während der Sitzung Unfälle, aber Zarco erholte sich schnell und stand wieder auf den Beinen.
