Francesco Bagnaia, el actual campeón de MotoGP, terminó en primer lugar en la sesión de entrenamientos del viernes en Mugello, con Alex Rins de Yamaha en segundo. El tiempo de vuelta de Bagnaia de 1m44.938s fue más de un cuarto de segundo más rápido que el resto del pelotón, quedando apenas por debajo del nuevo récord de la pista. Sin embargo, Bagnaia está siendo actualmente investigado por obstruir a Alex Márquez durante la sesión. A pesar de esto, el sólido rendimiento de Yamaha en Mugello continuó, con Rins mostrando su velocidad y el novato Pedro Acosta asegurando un lugar en el Q2. La caída de Acosta más temprano en el día no obstaculizó su progreso. Brad Binder de KTM también tuvo un tiempo de vuelta prometedor, pero fue excluido debido a los límites de la pista. Miguel Oliveira de Trackhouse Aprilia tuvo su mejor actuación de la temporada hasta ahora, terminando en cuarto lugar. Marc Márquez de Gresini Ducati logró evitar la eliminación del Q1 con el quinto tiempo más rápido. Otras actuaciones destacadas vinieron de Enea Bastianini, Jorge Martín y Alex Márquez, todos pilotando Ducatis. Maverick Viñales y Aleix Espargaró aseguraron las últimas plazas en el Q2 con sus Aprilias. Fabio Quartararo de Yamaha terminó a cuatro décimas de segundo detrás de Rins, evitando por poco una participación en el Q1. Takaaki Nakagami de Honda tuvo una actuación impresionante, superando a sus compañeros de equipo RC213V en más de cuatro décimas de segundo.
