Lors de la séance d’entraînement d’ouverture à Jerez, le pilote de la Gresini Ducati, Alex Marquez, a pris la tête, dépassant son frère Marc, qui avait mené la majeure partie de la séance. Pendant la plupart des 45 minutes, c’était un 1-2 des Marquez. Cependant, Alex Marquez a pris la décision stratégique de changer de pneus à la fin de la séance, ce qui lui a permis de dépasser son frère et de terminer avec le temps le plus rapide de 1m36.630s. Il était demi-seconde devant Marc Marquez et son coéquipier. Maverick Vinales, qui avait dominé au Circuit des Amériques, a assuré la troisième place après avoir équipé un nouvel ensemble de pneus. Aleix Espargaro a amélioré sa position lors du dernier tour, terminant quatrième. Franco Morbidelli, sur une Ducati de 2024, a terminé cinquième, tandis que d’autres pilotes sur la même moto, Jorge Martin, Pecco Bagnaia et Enea Bastianini, ont terminé neuvième, douzième et treizième respectivement. Le pilote wildcard de la KTM, Dani Pedrosa, a été le plus rapide parmi les pilotes RC16, en sixième position, suivi de près par Brad Binder. Les autres pilotes wildcard, Lorenzo Savadori et Stefan Bradl, ont terminé vingt-troisième et vingt-quatrième, reléguant Luca Marini à la dernière position. Savadori pilote une moto expérimentale avec de nouvelles fonctionnalités que Aprilia prévoit d’utiliser plus tard dans la saison. La RC213V de Bradl, en revanche, a subi des changements significatifs en termes d’aérodynamique et d’unité de siège par rapport aux motos régulières. Deux pilotes, Johann Zarco et Augusto Fernandez, ont eu des accidents lors de la séance, mais Zarco s’est rapidement remis sur pied.
