Francesco Bagnaia, o atual campeão da MotoGP, terminou em primeiro lugar na sessão de treinos de sexta-feira em Mugello, com Alex Rins da Yamaha em segundo. O tempo de volta de Bagnaia de 1m44.938s foi mais de um quarto de segundo mais rápido do que o resto do pelotão, ficando apenas um pouco abaixo do novo recorde da pista. No entanto, Bagnaia está atualmente sendo investigado por obstruir Alex Marquez durante a sessão. Apesar disso, o desempenho forte da Yamaha em Mugello continuou, com Rins mostrando sua velocidade e o estreante Pedro Acosta garantindo uma vaga no Q2. A queda de Acosta mais cedo no dia não atrapalhou seu progresso. Brad Binder da KTM também teve um tempo de volta promissor, mas foi excluído devido aos limites da pista. Miguel Oliveira da Trackhouse Aprilia teve sua melhor apresentação da temporada até agora, terminando em quarto lugar. Marc Marquez da Gresini Ducati conseguiu evitar a eliminação do Q1 com o quinto tempo mais rápido. Outras performances notáveis vieram de Enea Bastianini, Jorge Martin e Alex Marquez, todos pilotando Ducatis. Maverick Vinales e Aleix Espargaro garantiram as últimas vagas no Q2 com suas Aprilias. Fabio Quartararo da Yamaha terminou um quarto de segundo atrás de Rins, evitando por pouco uma participação no Q1. Takaaki Nakagami da Honda teve um desempenho impressionante, superando seus companheiros de equipe RC213V em mais de quatro décimos de segundo.
